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细胞凋亡之线粒体膜电位检测

2016-09-26 细胞之邦

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线粒体膜电位与细胞凋亡的关系
什么是线粒体膜电位?
线粒体为一双层膜围成的囊状结构, 外膜与内膜间的空腔称为外室, 由内膜包围的腔称为内室或线粒体基质.线粒体外膜通透性较大, 分子质量在15 ku 以下物质可自由通过, 因此胞质成分与线粒体外室基本相似. 线粒体内膜通透性小, 分子质量大于1.5 ku 物质不易通过.但内膜存在一些载体蛋白与通道以便运输某些物质. 质子泵存在于内膜, 它将基质内质子泵入外室, 从而形成横跨线粒体内膜的线粒体跨膜电位( mitochondrial transmembrane potential , Δψm ) .跨膜电位内室为负, 外室为正.使一些正电荷荧光染料如rhodamine 123 、DiOC6 (3) 、JC-1 、CMX-ROS 可结合到线粒体基质。
 线粒体膜电位与细胞凋亡的关系(见science图)
实验步骤——线粒体膜电位(JC-1染色)
1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色;

2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清;

3.染色:加入200μl JC-1染液,混匀,37℃避光孵育15分钟,上机;

4.洗涤:加入500μl 洗液;

5.离心:1000转/分,5分钟,弃上清,加入200μl 洗液,混匀,上机

JC-1做线粒体膜电位的优缺点
JC-1比Rhodamine 123更灵敏,比DIOC6(3)特异性更高;但JC-1占用了红、绿荧光通道,很难与其它染料共用,而且对温度、pH敏感。


文章参考来源:暨大流式

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